2×PCR Master Mix (senza colorante)
PCR Master Mix è un tipo di soluzione premiscelata PCR convenzionale pronta per l'uso, che include Taq DNA polimerasi, miscela dNTP MgCl2 e tampone ottimizzato.Durante la reazione, è possibile aggiungere solo il primer e il modello per l'amplificazione, il che semplifica notevolmente le fasi operative dell'esperimento.Questo prodotto contiene eccellenti stabilizzanti e può essere conservato per 3 mesi a 4℃.Il prodotto PCR ha una sporgenza 3′-dA e può essere facilmente clonato nel vettore T.
Condizioni di archiviazione
Il prodotto deve essere conservato a -25℃~ -15℃ per due anni.
Specifiche
| Fedeltà (contro Taq) | 1× |
| Inizio caldo | No |
| Sporgenza | 3′-A |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi |
| Formato della reazione | SuperMix o MasterMix |
| Velocità di reazione | Standard |
| Tipologia di prodotto | Miscela principale PCR (2×) |
Istruzioni
1.Sistema di reazione
| Componenti | Dimensioni (μL) |
| DNA modello | Adatto |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| Miscela master per PCR | 25 |
| DDH2O | A 50 |
2.Protocollo di amplificazione
| Passaggi del ciclo | Temperatura (°C) | Tempo | Cicli |
| Pre-denaturazione | 94 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione | 94 ℃ | 30 secondi | 35 |
| Ricottura | 50-60 ℃ | 30 secondi | |
| Estensione | 72 ℃ | 30-60 secondi/KB | |
| Estensione finale | 72 ℃ | 10 minuti | 1 |
Appunti:
1) Utilizzo del modello: 50-200 ng di DNA genomico;0,1-10 ng di DNA plasmidico.
2)Mg2+concentrazione: questo prodotto contiene 3 mM di MgCl2 adatto alla maggior parte delle reazioni PCR.
3) Temperatura di ricottura: fare riferimento al valore teorico Tm dei Primer.La temperatura di ricottura può essere impostata su 2-5 ℃ inferiore al valore teorico del primer.
4) Tempo di estensione: per l'identificazione molecolare si consigliano 30 sec/kb.Per la clonazione genetica, 60sec/kb è consigliato.
Appunti
1.Per la vostra sicurezza e salute, indossate camici da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.
2.Solo per uso di ricerca!
