Perossidasi (fonte di rafano) Sinonimo: perossido di idrogeno ossidoreduttasi;HRP

La perossidasi di rafano (HRP) è isolata dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi delle ferroprotoporfirine.L'HRP si combina facilmente con il perossido di idrogeno (H2O2).Il complesso [HRP-H2O2] risultante può ossidare un'ampia varietà di donatori di idrogeno:
Donatore + H2O2 → Donatore ossidato + 2 H2O
L'HRP ossiderà vari substrati (vedere Tabella 1):
• Cromogenico
• Chemiluminescente (come luminol o isoluminol)
• Fluorogeni (come tiramina, acido omovanillico o acido 4-idrossifenil acetico)
L'HRP è un polipeptide a catena singola che contiene quattro ponti disolfuro.L'HRP è una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati.La composizione dei carboidrati è costituita da galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda dell'isoenzima specifico.

HRP è un'etichetta ampiamente utilizzata per le immunoglobuline in molte diverse applicazioni immunochimiche, tra cui immunoblotting, immunoistochimica ed ELISA.L'HRP può essere coniugato agli anticorpi mediante diversi metodi, tra cui glutaraldeide, ossidazione del periodato, attraverso legami disolfuro e anche tramite reticolanti diretti amino e tiolo.L'HRP è il marcatore più desiderato per gli anticorpi, poiché è il più piccolo e il più stabile dei tre marcatori enzimatici più popolari (perossidasi, β-galattosidasi, fosfatasi alcalina) e la sua glicosilazione porta a un legame non specifico inferiore.È stata pubblicata una revisione dei metodi di coniugazione con glutaraldeide e periodato.

La perossidasi viene utilizzata anche per la determinazione del glucosio4 e dei perossidi in soluzione.Diverse pubblicazioni, 6-24 tesi, 25-29 e dissertazioni 30-46 hanno citato l'uso del P8375 nei loro protocolli di ricerca.