Fosfatasi alcalina (ALP)

La fosfatasi alcalina deriva da un ceppo ricombinante di E. coli che porta il gene TAB5.L'enzima catalizza la defosforilazione delle estremità 5' e 3' dei fosfomonoesteri del DNA e dell'RNA.Inoltre, idrolizza il ribosio, così come i desossiribonucleosidi trifosfati (NTP e dNTP).La fosfatasi alcalina TAB5 agisce sulle estremità 5' sporgenti, 5' incassate e smussate.La fosfatasi può essere utilizzata in molte applicazioni di biologia molecolare, come la clonazione o l'etichettatura dell'estremità della sonda per rimuovere le estremità fosforilate del DNA o dell'RNA.Negli esperimenti di clonazione, la defosforilazione impedisce l'autolegatura del DNA plasmidico linearizzato.Può anche degradare dNTP non incorporati nelle reazioni PCR per preparare un modello per il sequenziamento del DNA.L'enzima viene completamente e irreversibilmente inattivato mediante riscaldamento a 70°C per 5 minuti, rendendo così superflua la rimozione della fosfatasi prima della ligazione o dell'etichettatura finale.