DNasi I (senza RNAsi)(5u/ul)
N. cat.: HC4007A
La DNasi I (desossiribonucleasi I) è un'endodesossiribonucleasi in grado di digerire il DNA a singolo o doppio filamento.Riconosce e scinde i legami fosfodiestere per produrre monodeossinucleotidi o oligodeossinucleotidi a filamento singolo o doppio con gruppi fosfato al terminale 5' e idrossile al terminale 3'.L'attività della DNasi I dipende dal Ca2+e può essere attivato da ioni metallici bivalenti come Mn2+e Zn2+.5 mmCa2+protegge l'enzima dall'idrolisi.Alla presenza di Mons2+, l'enzima potrebbe riconoscere e scindere in modo casuale qualsiasi sito su qualsiasi filamento di DNA.Alla presenza di Mn2+, i doppi filamenti di DNA possono essere simultaneamente riconosciuti e tagliati quasi nello stesso sito per formare frammenti di DNA con estremità piatte o frammenti di DNA con estremità appiccicose con 1-2 nucleotidi sporgenti.
Componenti
| Nome | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNasi I, privo di RNasi | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×tampone DNasi I | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5×10 ml |
Condizioni di archiviazione
-25℃~-15℃ per la conservazione;Trasporto sotto impacchi di ghiaccio.
Istruzioni
1. Preparare la soluzione di reazione nella provetta RNasi-free secondo le proporzioni elencate di seguito:
| Componente | Volume |
| RNA | X µg |
| 10 × Tampone DNasi I | 1μL |
| DNasi I, priva di RNasi (5U/μL) | 1 U per µg di RNA① |
| DDH2O | Fino a 10μL |
Nota: ①Calcola il volume di DNasi I che deve essere aggiunto in base alla quantità di RNA.
2. 37 ℃ per 15 minuti;
3. Aggiungere 0,5 M EDTA alla concentrazione finale di 2,5 mM~5 mM e riscaldare a 65 ℃ per 10 minuti per arrestare la reazione.Il campione può essere utilizzato direttamente per la reazione successiva come la trascrizione inversasperimentare.
Definizione di unità
Una unità è definita come la quantità di enzima che degraderà completamente 1μg di pBR322DNA in 10 minuti a 37℃.
Controllo di qualità
RNasi:5U di DNasi I con 1,6 µg di RNA MS2 per 4 ore a 37 ℃ non producono alcuna degradazione poichédeterminato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Appunti
1. Preparare da soli 0,5MEDTA.
2. Utilizzare 1U di DNasi I per µg di RNA.Tuttavia, se l'RNA è inferiore a 1 µg, utilizzare 1U DNasi I.
3. Posizionare l'enzima sul ghiaccio durante il funzionamento.
