Kit per la genotipizzazione del topo

N. cat.: HCR2021A

Questo prodotto è un kit progettato per l'identificazione rapida dei genotipi murini, inclusa l'estrazione grezza del DNA e il sistema di amplificazione PCR.Il prodotto può essere utilizzato per l'amplificazione PCR direttamente dalla coda, dall'orecchio, dalle dita dei piedi e da altri tessuti del topo dopo semplice scissione mediante tampone di lisi e proteinasi k.Nessuna digestione notturna, estrazione con fenolo-cloroformio o purificazione su colonna, il che è semplice e riduce il tempo degli esperimenti.Il prodotto è adatto per l'amplificazione di frammenti target fino a 2kb e reazioni PCR multiplex con un massimo di 3 paia di primer.La miscela PCR diretta 2×Mouse Tissue Direct contiene DNA polimerasi geneticamente modificata, Mg²⁺, dNTP e un sistema tampone ottimizzato per fornire elevata efficienza di amplificazione e tolleranza agli inibitori, in modo che le reazioni PCR possano essere eseguite aggiungendo template e primer e reidratando il prodotto a 1×.Il prodotto PCR amplificato con questo prodotto ha una base "A" prominente all'estremità 3' e può essere utilizzato direttamente per la clonazione TA dopo la purificazione.

Componenti

Condizioni di archiviazione

I prodotti devono essere conservati a -25~-15℃ per 2 anni.Dopo lo scongelamento, il tampone di lisi può essere conservato a 2~8℃ per usi multipli a breve termine e miscelato bene durante l'uso.

Applicazione

Questo prodotto è adatto per l'analisi knockout del topo, il rilevamento transgenico, la genotipizzazione e così via.

Caratteristiche

1.Funzionamento semplice: non è necessario estrarre il DNA genomico;

2.Ampia applicazione: adatto per l'amplificazione diretta di vari tessuti murini.

Istruzioni

1.Rilascio di DNA genomico

1) Preparazione del lisato

Il lisato tissutale viene preparato in base al numero di campioni di topo da lisare (il lisato tissutale deve essere preparato in loco in base al dosaggio e miscelato accuratamente per l'uso) e la proporzione di reagenti richiesti per un singolo campione è la seguente:

2) Preparazione e lisi del campione

Uso consigliato del tessuto

Prendere una quantità adeguata di campioni di tessuto murino in provette da centrifuga pulite, aggiungere 200μL di lisato di tessuto fresco in ciascuna provetta da centrifuga, vortexare e agitare, quindi incubare a 55°C per 30 minuti, quindi riscaldare a 98°C per 3 minuti.

3) Centrifugazione

Agitare bene il lisato e centrifugare a 12.000 giri/min per 5 minuti.Il surnatante può essere utilizzato come modello per l'amplificazione PCR.Se è necessario conservare il modello, trasferire il surnatante in un'altra provetta da centrifuga sterile e conservare a -20°C per 2 settimane.

2.Amplificazione PCR

Rimuovere la miscela 2×Mouse Tissue Direct PCR da -20 ℃ e scongelarla su ghiaccio, mescolare sottosopra e preparare il sistema di reazione PCR secondo la seguente tabella (operare su ghiaccio):

Nota:

a) La quantità aggiunta non deve superare 1/10 del sistema e, se ne viene aggiunta troppa, l'amplificazione della PCR potrebbe essere inibita.

Condizioni PCR consigliate

Nota:

a) Temperatura di ricottura: con riferimento al valore Tm del primer, si consiglia di impostare la temperatura di ricottura sul valore Tm più piccolo del primer +3~5℃.

Problemi comuni e soluzioni

1.Nessuna striscia mirata

1) Prodotto di lisi eccessivo.Scegli la quantità di template più appropriata, solitamente non più di 1/10 del sistema;

2) Dimensione del campione troppo grande.Diluire il lisato 10 volte e quindi amplificare o ridurre la dimensione del campione e ripetere la lisi;

3) I campioni di tessuto non sono freschi.Si consiglia di utilizzare campioni di tessuto fresco;

4) Scarsa qualità del primer.Utilizzare il DNA genomico per l'amplificazione per verificare la qualità del primer e ottimizzare la progettazione del primer.

2.Amplificazione non specifica

1) La temperatura di ricottura è troppo bassa e il numero di cicli è troppo alto.Aumentare la temperatura di ricottura e ridurre il numero di cicli;

2) La concentrazione del modello è troppo alta.Ridurre la quantità di templato o diluire il templato 10 volte dopo l'amplificazione;

3) Scarsa specificità del primer.Ottimizza il design del primer.

Appunti

1.Per evitare la contaminazione incrociata tra i campioni, è necessario preparare più strumenti di campionamento e la superficie degli strumenti può essere pulita con una soluzione di ipoclorito di sodio al 2% o un detergente per acido nucleico dopo ogni campionamento se è necessario un uso ripetuto.

2.Si consiglia di utilizzare tessuti murini freschi e il volume di campionamento non deve essere troppo grande per evitare di influenzare i risultati dell'amplificazione.

3.Il tampone di lisi deve evitare frequenti congelamenti e scongelamenti e può essere conservato a 2~8℃ per un uso multiplo a breve termine.Se conservato a bassa temperatura, possono verificarsi precipitazioni e deve essere completamente sciolto prima dell'uso.

4.La PCR Mix deve evitare frequenti operazioni di congelamento-scongelamento e può essere conservata a 4°C per un uso ripetuto a breve termine.

5.Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca scientifica sperimentale e non deve essere utilizzato nella diagnosi o nel trattamento clinico.