Inibitore della rnasi (senza glicerolo)
L'inibitore della RNasi murina è un inibitore ricombinante della RNasi murina espresso e purificato da E.coli.Si lega alla RNasi A, B o C in un rapporto 1:1 attraverso un legame non covalente, inibendo così l'attività dei tre enzimi e proteggendo l'RNA dalla degradazione.Tuttavia, non è efficace contro RNasi 1, RNasi T1, S1 Nucleasi, RNasi H o RNasi da Aspergillus.L'inibitore della RNasi murino è stato testato mediante RT-PCR, RT-qPCR e mRNA IVT ed è risultato compatibile con varie trascrittasi inverse commerciali, DNA polimerasi e RNA polimerasi.
Rispetto agli inibitori della RNasi umani, l'inibitore della RNasi murino non contiene due cisteine che sono altamente sensibili all'ossidazione che causa l'inattivazione dell'inibitore.Ciò lo rende stabile a basse concentrazioni di DTT (meno di 1 mM).Questa caratteristica lo rende adatto all'uso in reazioni in cui elevate concentrazioni di DTT sono avverse alla reazione (ad esempio, RT-PCR in tempo reale).
Aapplicazione
Questo prodotto può essere ampiamente utilizzato in qualsiasi esperimento in cui è possibile l'interferenza dell'RNasi per evitare la degradazione dell'RNA, come ad esempio:
1.Sintesi del cDNA del primo filamento, RT-PCR, RT-qPCR, ecc.;
2.Proteggere l'RNA dalla degradazione nella trascrizione/traduzione in vitro (ad esempio replicazione virale in vitro);
3.Inibizione dell'attività della RNasi durante l'isolamento e la purificazione dell'RNA.
Condizioni di archiviazione
Conservare a -25～-15℃;
Cicli di gelo-disgelo ≤ 5 volte;
Valido per 1 anno.
Definizione di unità
Una unità è definita come la quantità di inibitore della RNasi necessaria per inibire l'attività di 5 ng di RNasi A del 50%.
Peso molecolare
L'inibitore della RNasi (privo di glicerolo) è una proteina da 50 kDa.
Controllo di qualità
Esonucleasi Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima con 1 μg di DNA digerito λ-Hind III per 16 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile del DNA, come determinato mediante elettroforesi su gel.
Attività dell'endonucleasi:
L'incubazione di 40 U di enzima con 1 μg λ di DNA per 16 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile del DNA, come determinato mediante elettroforesi su gel.
Intaccatura Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima con 1 μg di pBR322 per 16 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile del DNA, come determinato mediante elettroforesi su gel.
RNasi Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima con 1,6 μg di RNA MS2 per 4 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile dell'RNA, come determinato mediante elettroforesi su gel.
E.coliDNA:
40 U di enzima vengono rilevate da TaqMan qPCR.Il DNA di E.coli è ≤ 0,1pg/40U.
Nnotas
1.Non agitare o mescolare violentemente per prevenire l'inattivazione degli enzimi.
2. L'inibitore della RNasi è attivo a temperature comprese tra 25 ℃ e 55 ℃ e viene inattivato a ≥ 65 ℃.
3.L'attività di RNasi H, RNasi 1 e RNasi T1 non è inibita.
4.L'intervallo di pH per inibire l'attività della RNasi è ampio (attivo a pH 5-9), mostrando la massima attività a pH 7-8.
