Reagente di rilascio del campione
Il reagente di rilascio del campione è destinato a scenari diagnostici POCT molecolari.Per i due sistemi di amplificazione diretta LAMP e PCR ad amplificazione diretta, non è necessaria l'estrazione dell'acido nucleico.Il lisato grezzo del campione può essere amplificato direttamente, il gene bersaglio può essere rilevato con precisione, il tempo di rilevamento del campione può essere ulteriormente ridotto, il che corrisponde perfettamente ai requisiti applicativi del POCT molecolare.È adatto per tamponi nasali, faringei e altri tipi di campioni.I campioni elaborati possono essere utilizzati direttamente per il rilevamento quantitativo mediante PCR o LAMP con fluorescenza in tempo reale e gli stessi risultati dei metodi di estrazione convenzionali possono essere ottenuti senza complicate operazioni di estrazione dell'acido nucleico.
Condizioni di archiviazione
Trasportare e conservare a temperatura ambiente.
Controllo di qualità
Rilevazione funzionale – qPCR quantitativa: il sistema di reagente di rilascio del campione da 800μl è stato amplificato
con 1000 copie del nuovo pseudovirus, un campione di tampone nasale, risultanti curve di amplificazione simili eValori ΔCt entro ± 0,5 Ct.
Procedura sperimentaleris
1. Prendere 800 μl di reagente di rilascio del campione e distribuire la soluzione di lisi in una provetta di campionamento da 1,5 ml
2. Prendere il tampone nasale o il tampone faringeo con il tampone; Procedura di campionamento del tampone nasale: prendere il tampone sterile e inserirlo nelle narici, avanzare lentamente fino a circa 1,5 cm di profondità, ruotare delicatamente 4 volte contro la mucosa nasale per più di 15 secondi , quindi ripetere la stessa operazione sull'altra cavità nasale con lo stesso tampone. Procedura di prelievo del tampone faringeo: prendere il tampone sterile e pulire delicatamente e rapidamente le tonsille faringee e la parete faringea posteriore per 3 volte.
3.Posizionare immediatamente il tampone nella provetta di campionamento.La testa del tampone deve essere ruotata e miscelata nella soluzione di conservazione per almeno 30 secondi per garantire che il campione sia completamente eluito nella provetta di campionamento.
4. Incubazione a temperatura ambiente (20~ 25℃) per 1 minuto, la preparazione del tampone di lisi è completata.
5. Sia il sistema RT-PCR da 25μl che il sistema RT-LAMP erano compatibili con l'aggiunta di una quantità di 10μl di modello per gli esperimenti di rilevamento.
Appunti
1. La quantità minima di lisato diretto del campione corrispondente a un singolo tampone può essere regolata a 400μl, che può essere regolata in base alle esigenze del test.
2. Una volta che il campione è stato processato dal reagente di rilascio del campione, si consiglia di condurre la fase successiva del test il prima possibile, l'intervallo di tempo di attesa è preferibilmente inferiore a 1 ora.
3. Il pH del lisato campione è acido e il sistema di rilevamento deve avere un determinato tampone.È adatto per la maggior parte del rilevamento della fluorescenza PCR, RT-PCR e LAMP con tampone pH, ma non è adatto per il rilevamento colorimetrico LAMP senza tampone.
