Robustart Taq DNA polimerasi

Robustart Taq DNA Polymerase è una DNA polimerasi hot start.Questo prodotto non solo può inibire meglio la reazione non specifica causata dalla ricottura non specifica dei primer o dall'aggregazione dei primer nel processo di preparazione e amplificazione del sistema PCR.Pertanto, ha un'eccellente specificità ed è più efficace per l'amplificazione di modelli a bassa concentrazione ed è adatto per la reazione di amplificazione PCR multiplex.Inoltre, questo prodotto ha un'ottima applicabilità e si possono ottenere risultati di amplificazione stabili in diversi tipi di reazioni PCR.

Componenti

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerasi

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ libero) (opzionale)

3.MgCl 25 mM₂(opzionale)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ libero) non contiene dNTP e Mg²+, aggiungere dNTP e MgCl₂durante la preparazione del sistema di reazione.

Applicazioni consigliate

1.Amplificazione veloce.

2.Amplificazione multipla.

3.Amplificazione diretta di sangue, tamponi e altri campioni.

4.Rilevazione delle malattie respiratorie.

Condizioni di conservazione

-20°C per la conservazione a lungo termine, deve essere miscelato bene prima dell'uso, evitare frequenti congelamenti e scongelamenti.

*Se si verificano precipitazioni dopo la refrigerazione, è normale;si consiglia di equilibrare a temperatura ambiente prima della miscelazione e dell'uso.

Definizione di unità

Un'unità attiva (U) è definita come la quantità di enzima che incorpora 10 nmol di desossiribonucleotide in materiale insolubile in acido a 74°C per 30 minuti utilizzando DNA di sperma di salmone attivato come modello/primer.

Controllo di qualità

1.Purezza elettroforetica SDS-PAGE superiore al 98%.

2.Sensibilità di amplificazione, controllo batch-to-batch, stabilità.

3.Nessuna attività nucleasica esogena, nessuna contaminazione da endonucleasi o esonucleasi esogena

Istruzioni

Impostazione della reazione

Appunti:

1) un.Il tampone non contiene dNTP e Mg²+, aggiungere dNTP e MgCl₂durante la preparazione del sistema di reazione.

2) b.Se utilizzate per qPCR/qRT-PCR, è necessario aggiungere sonde fluorescenti al sistema di reazione.Di solito, una concentrazione finale di primer di 0,2 μM darà buoni risultati;se le prestazioni della reazione sono scarse, la concentrazione del primer può essere regolata nell'intervallo 0,2-1 μM.La concentrazione della sonda è solitamente ottimizzata nell'intervallo 0,1-0,3 μM.È possibile eseguire esperimenti sul gradiente di concentrazione per trovare la migliore combinazione di primer e sonda.

Protocollo di ciclismo termico

Appunti

1.La velocità di amplificazione della DNA polimerasi veloce non deve essere inferiore a 1 kb/10 s.La velocità di aumento e diminuzione della temperatura, la modalità di controllo della temperatura e l'efficienza di conduzione del calore dei diversi strumenti PCR variano notevolmente, pertanto si consiglia di ottimizzare le condizioni di reazione ottimali per lo specifico strumento PCR veloce.

2.Il sistema è altamente adattabile, con specificità e sensibilità più elevate.

3.Adatto per l'uso come reagenti di rilevamento PCR ad alta sensibilità e può essere utilizzato in reazioni di amplificazione PCR multiplex.

4.attività della polimerasi 5′→3′, attività dell'esonucleasi 5′→3′;nessuna attività di esonucleasi 3′→5′;nessuna funzione di correzione di bozze.

5.Adatto per test qualitativi e quantitativi di PCR e RT-PCR.

6.L'estremità 3' del prodotto PCR è A, che può essere clonato direttamente in un vettore T.

7.Il metodo in tre fasi è consigliato per primer con basse temperature di ricottura o per l'amplificazione di frammenti più lunghi di 200 bp.