UNG sensibile alla temperatura
L'UNG sensibile alla temperatura (TS-UNG) è ottenuto mediante espressione ricombinante in E. coli.L'enzima catalizza il rilascio di uracile libero dal DNA a singolo e doppio filamento contenente uracile ed è inattivo contro l'RNA.Rispetto all'enzima UNG convenzionale di origine del gene di E. coli, l'enzima TS-UNG ha un'attività maggiore a basse temperature (20 ℃ ~ 37 ℃) ed è sensibile alla temperatura e facilmente inattivato (50 ℃), evitando la degradazione dell'amplificazione contenente dUTP prodotti a temperatura ambiente dall'attività residua che può rimanere dopo l'inattivazione dell'enzima UNG convenzionale.Pertanto, l'enzima TS-UNG non è solo adatto per la reazione di prevenzione della contaminazione della PCR, ma si adatta bene anche al programma di amplificazione RT-PCR e può essere utilizzato nella reazione di prevenzione della contaminazione della RT-PCR.
Applicazione consigliata
Amplificazione della prevenzione della contaminazione
Condizioni di conservazione
-20°C per la conservazione a lungo termine, deve essere miscelato bene prima dell'uso, evitare frequenti congelamenti e scongelamenti.
Buffer di archiviazione
Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, stabilizzante, 50% glicerolo.
Definizione di unità
La quantità di enzima richiesta per degradare 1μg di DNA a filamento singolo contenente basi dU in 1 ora a 37°C è 1 unità di attività (U).
Controllo di qualità
1.Purezza elettroforetica SDS-PAGE superiore al 98%
2.Attività di degradazione, controllo batch-to-batch, stabilità
3.Nessuna attività nucleasica esogena, nessuna contaminazione da endonucleasi esogena o esonucleasi.
Istruzioni
| Componenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 10 × tampone PCR (senza dNTP, Mg²+gratuito) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200μM |
| dUTP (sostituisce dTTP) | - | 200-600μM |
| MgCl 25 mM2 | 2-8 µl | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × miscela di primerUN | 2 | 1× |
| Modello | - | <1μg/reazione |
| ddH₂O | A 50 | - |
Nota: a: Se utilizzata per qPCR/qRT-PCR, la sonda fluorescente deve essere aggiunta al sistema di reazione.Di solito, una concentrazione finale di primer di 0,2 μM può dare buoni risultati;quando le prestazioni della reazione sono scarse, la concentrazione del primer può essere regolata nell'intervallo 0,2-1 μM.Di solito, la concentrazione della sonda è ottimizzata nell'intervallo 0,1-0,3 μM.È possibile eseguire esperimenti sul gradiente di concentrazione per trovare la migliore combinazione di primer e sonda.
Appunti
1.La temperatura di reazione ottimale dell'enzima TS-UNG è relativamente bassa e può essere ottimizzata nell'intervallo di 20 ℃ ~ 37 ℃, il dosaggio dell'enzima e il tempo di reazione possono essere ottimizzati nell'intervallo di 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minuti;e l'enzima può essere inattivato nel processo di trascrizione inversa.
2.È adatto per PCR e RT-PCR per prevenire la contaminazione.
3.Evitare frequenti gelate e disgeli e non esporre a grandi sbalzi di temperatura.
4.Diversi geni da amplificare hanno diversa efficienza di utilizzo del dUTP e sensibilità all'enzima UNG, pertanto, se l'uso del sistema UNG porta ad una diminuzione della sensibilità di rilevamento, il sistema di reazione deve essere regolato e ottimizzato, se è necessario supporto tecnico, contattare la nostra azienda.
