Bst 2.0 DNA polimerasi (senza glicerolo)
La Bst DNA polimerasi V2 deriva dalla DNA polimerasi I del Bacillus stearothermophilus, che ha un'attività della DNA polimerasi 5′→3′ e una forte attività di sostituzione della catena, ma nessuna attività di esonucleasi 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 è ideale per lo spostamento del filamento, l'amplificazione isotermica LAMP (amplificazione isotermica mediata da loop) e il sequenziamento rapido.
Componenti
| Componente | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerasi V2 (senza glicerolo) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 buffer HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Applicazioni
1.Amplificazione isotermica LAMP
2.Reazione di spostamento singolo del filamento di DNA
3.Sequenziamento del gene ad alto GC
4.Sequenziamento del DNA a livello di nanogrammi.
Condizioni di conservazione
Trasporto a temperatura inferiore a 0°C e conservazione a -25°C~-15°C.
Definizione di unità
Una unità è definita come la quantità di enzima che incorpora 25 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 65°C.
Controllo di qualità
1.Saggio della purezza proteica (SDS-PAGE):La purezza della Bst DNA polimerasi V2 è ≥99% determinata mediante analisi SDS-PAGE utilizzando il rilevamento Coomassie Blue.
2.Attività di esonucleasi:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimo di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 con 1 μg di DNA digerito λ -Hind Ⅲ per 16 ore a 37 ℃ non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile come determinato.
3.Attività del Nickase:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimo di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 con 1 μg di DNA pBR322 per 16 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile come determinato.
4.Attività RNasi:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimo di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 con 1,6 μg di RNA MS2 per 16 ore a 37°C non ha prodotto alcuna degradazione rilevabile come determinato.
5.DNA dell'Escherichia coli:120 U di Bst DNA polimerasi V2 vengono sottoposti a screening per la presenza di DNA genomico di E. coli utilizzando TaqMan qPCR con primer specifici per il locus 16S rRNA di E. coli.La contaminazione del DNA genomico di E. coli è ≤1 copia.
Reazione LAMPADA
| Componenti | 25μL |
| 10 buffer HC Bst V2 | 2,5 µl |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 µl |
| dNTP (10 mM ciascuno) | 3,5 µl |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 microlitri |
| Miscela di primerb | 6 µl |
| Bst DNA polimerasi V2 (senza glicerolo) (8 U/uL) | 1 ml |
| Modello | ×μL |
| ddH₂O | Fino a 25 µl |
Appunti:
1) un.SYTOTM 16 Verde (25×): secondo le esigenze sperimentali, altri coloranti possono essere utilizzati come sostituti;
2) b.Miscela di primer: ottenuta miscelando 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ed altri volumi.
Reazione e condizione
1 × HC Bst V2 Buffer, la temperatura di incubazione è compresa tra 60°C e 65°C.
Inattivazione del calore
80 °C, 20 minuti
