Grado GMP Ultra Nuclease
N. cat.: HC2016A
UltraNuclease GMP-grade è espresso e purificato in Escherichia coli (E.coli) mediante ingegneria genetica e preparato in ambienti GMP.Può ridurre la viscosità del surnatante cellulare e del lisato cellulare nella ricerca scientifica, aumentare l'efficienza della purificazione delle proteine e migliorare la ricerca funzionale delle proteine.Il prodotto può anche ridurre i residui di acido nucleico dell'ospite al grado pg, migliorando le prestazioni e la sicurezza dei prodotti biologici in applicazioni quali la purificazione dei virus, la produzione di vaccini e la produzione farmaceutica di proteine/polisaccaridi.Inoltre, il prodotto può essere utilizzato anche per prevenire l'aggregazione delle cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC) nella terapia cellulare e nello sviluppo di vaccini.
UltraNuclease viene fornito sotto forma di reagente sterilizzato, eluito in tampone (20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% glicerina), con l'aspetto di un liquido incolore e trasparente.Questo prodotto è prodotto secondo i requisiti di processo GMP e fornito in forma liquida.
Componenti
UltraNuclease di grado GMP (250 U/μL)
Condizioni di archiviazione
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a -25℃~-15°C per due anni.
Se il prodotto è aperto ed è stato conservato a 4°C per più di una settimana, si consiglia di filtrarloil prodotto per prevenire la contaminazione microbica.
Specifiche
| Host di espressione | E. coli ricombinante con il gene UltraNuclease |
| Peso molecolare | 26,5 kDa |
| punto elettrico | 6,85 |
| Purezza | ≥99% (PAGINA SDS) |
| Buffer di archiviazione | Tris-HCL 20 mM pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, 50% glicerina |
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Definizione di unità | La definizione di un'unità di attività (U) è la quantità di enzima utilizzatamodificare il valore di assorbimento di ΔA260 di 1,0 in 30 minuti in un contenitore da 2,625 mlsistema di reazione a 37℃ con un pH di 8,0 (equivalente alla digestione completa di37 μg di DNA di sperma di salmone in oligonucleotidi). |
Istruzioni
1. Campione Collezione
Cellule aderenti: rimuovere il mezzo, lavare le cellule con PBS e rimuovere il surnatante.
Cellule in sospensione: raccogliere le cellule mediante centrifugazione, lavare le cellule con PBS, centrifugare a 6.000giri al minuto per 10 min, raccogliere il pellet.
Escherichia coli: raccogliere i batteri mediante centrifugazione, lavare una volta con PBS, centrifugare a 8.000giri al minuto per 5 minuti e raccogliere il pellet.
2. Trattamento del campione
Trattare i pellet cellulari raccolti con tampone di lisi nel rapporto tra massa (g) e volume (mL) 1: (10-20) o con metodi meccanici o chimici su ghiaccio o a temperatura ambiente (1 g di pellet cellulare contiene circa
109 celle).
3. Trattamento enzimatico
Aggiungere 1-5 mM di MgCl al sistema di reazione e regolare il pH su 8-9.
Aggiungere UltraNuclease in base al rapporto di 250 unità per digerire 1 g di pellet cellulari, incubare a 37℃ per più di 30 minuti.Fare riferimento al modulo "Tempo di reazione consigliato" per scegliere ildurata del trattamento.
4. Supernatante Collezione
Centrifugare a 12.000 giri per 30 minuti e raccogliere il surnatante.
Nota: se la soluzione è acida o alcalina o contiene alte concentrazioni di sale, detergenti odenaturanti, aumentare il dosaggio degli enzimi o prolungare di conseguenza il tempo di trattamento.
Condizioni di reazione consigliateons
| Parametro | Condizioni ottimali | Condizione efficace |
| Mg²+Concentrazione | 1-5 mm | 1-10 mm |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37℃ | 0-42℃ |
| Concentrazione DTT | 0-100 mm | >0 mm |
| Concentrazione di mercaptoetanolo | 0-100 mm | >0 mm |
| Concentrazione di cationi monovalenti | 0-20 mm | 0-150 mm |
| Concentrazione di fosfato lon | 0-10 mm | 0-100 mm |
Consigliato Reazione Tempo (37℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Quantità di UltraNucleasi (concentrazione finale) | Tempo di reazione |
| 0,25 U/ml | >10 ore |
| 2,5 U/ml | >4 ore |
| 25 U/ml | 30 minuti |
Appunti:
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
