Rnase A
La ribonucleasi A (RNasiA) è un polipeptide a filamento singolo contenente 4 legami disolfuro con un peso molecolare di circa 13,7 kDa.La RNasi A è un'endoribonucleasi che degrada specificamente l'RNA a filamento singolo nei residui C e U.Nello specifico, la scissione riconosce il legame fosfodiesterico formato dal ribosio 5' di un nucleotide e il gruppo fosfato sul ribosio 3' del nucleotide pirimidinico adiacente, in modo che i fosfati 2, 3'-ciclici vengano idrolizzati nei corrispondenti 3 ′fosfati nucleosidici (ad esempio pG-pG-pC-pA-pG viene scisso dalla RNasi A per generare pG-pG-pCp e A-PG).L'RNasi A è la più attiva nella scissione dell'RNA a filamento singolo.La concentrazione di lavoro consigliata è 1-100μG/mL, compatibile con vari sistemi di reazione.Una bassa concentrazione di sale (0-100 mM NaCl) può essere utilizzata per tagliare RNA a filamento singolo, RNA a doppio filamento e catene di RNA formate dall'ibridazione RNA-DNA.Tuttavia, ad un'elevata concentrazione di sale (≥0,3 M), l'RNasi A scinde specificamente solo l'RNA a filamento singolo.
L'RNasi A viene comunemente utilizzata per rimuovere l'RNA durante la preparazione del DNA plasmidico o del DNA genomico. Il fatto che la DNasi sia attiva o meno durante il processo di preparazione può facilmente influenzare la reazione.Il metodo tradizionale di bollitura a bagnomaria può essere utilizzato per inattivare l'attività della DNasi.Questo prodotto non contiene DNasi e proteasi e non richiede trattamento termico prima dell'uso.Inoltre, questo prodotto può essere utilizzato anche in esperimenti di biologia molecolare come l'analisi della protezione dell'RNasi e l'analisi della sequenza dell'RNA.
Condizioni di archiviazione
Il prodotto può essere conservato a -25～-15℃, valido per 2 anni.
Istruzioni
Questo è uno dei metodi comuni per preparare la soluzione di stoccaggio della RNasi A.Può essere preparato anche daaltri metodi secondo i metodi tradizionali presenti in laboratorio o nella letteratura di riferimento (esdirettamente sciogliendo in 10 mM di Tris-HCl, pH 7,5 o soluzione di Tris-NaCl)
1. Utilizzare acetato di sodio 10 mM (pH 5,2) per preparare 10 mg/mL di soluzione di conservazione della RNasi A
2. Riscaldamento a 100 ℃ per 15 minuti
3. Raffreddare a temperatura ambiente, aggiungere 1/10 di volume di Tris-HCl 1 M (pH 7,4), regolare il pH a 7,4 (peresempio, aggiungere 500 ml di soluzione di conservazione della RNasi 10 g/ml (1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sottoconfezionato a -20 ℃ per la conservazione congelata, che può essere stabile fino a 2 anni.
[Note]: Quando si fa bollire la soluzione di RNasiA in condizioni neutre, si formerà la precipitazione di RNasi;Fatelo bollire a un pH più basso e, se c'è precipitazione, si può osservare, che può essere causato dalla presenza di impurità proteiche.Se dopo l'ebollizione si riscontrano sedimenti, le impurità possono essere rimosse mediante centrifugazione ad alta velocità (13.000 giri/min) e quindi sottoconfezionate per la conservazione nel congelamento.
Informazioni sul prodotto
| Sinonimi | Ribonucleasi I;Ribonucleasi pancreatica;Ribonucleasi 3'-pirimidnooligonucleotidoidrolasi;RNAsi A;Endoribonulceasi I |
| N. CAS | 9001-99-4 |
| Aspetto | Polvere liofilizzata bianca |
| Peso molecolare | ~ 13,7 kDa (sequenza aminoacidica) |
| Valore del ph | 7.6 (intervallo di attività 6-10) |
| Temperatura adatta | 60 ℃ (intervallo di attività 15-70 ℃) |
| Agente attivante | Na2+.K+ |
| Inibitore | Inibitore della rnasi |
| Metodo di inattivazione | Non può essere inattivato mediante riscaldamento, si consiglia di utilizzare una colonna centrifuga |
| Origine | Bovino |
| Solubilità | Solubile in acqua (10 mg/ml) |
| Perdita su asciutto | ≤5,0% |
| Attività enzimatica | ≥60 unità Kunitz/mg |
| Punto isoelettrico | 9.6 |
Appunti
Per la vostra sicurezza e salute, indossate camici da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.
