Kit di estrazione del DNA/RNA virale
Questo kit è adatto per l'estrazione rapida di DNA/RNA virale ad elevata purezza da campioni quali tamponi nasofaringei, tamponi ambientali, surnatanti di colture cellulari e surnatanti di omogeneizzati di tessuti.Il kit si basa sulla tecnologia di purificazione con membrana di silice che elimina la necessità di utilizzare solventi organici fenolo/cloroformio o la lunga precipitazione di alcol per estrarre DNA/RNA virale di alta qualità.Gli acidi nucleici ottenuti sono privi di impurità e pronti per l'uso in esperimenti a valle come trascrizione inversa, PCR, RT-PCR, PCR in tempo reale, sequenziamento di prossima generazione (NGS) e Northern blot.
Condizioni di archiviazione
Conservare a 15 ~ 25 ℃ e trasportare a temperatura ambiente
Componenti
| Componenti | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| ddH2 O senza RNasi | 6 ml |
| Colonne di RNA FastPure | 100 |
| Provette di raccolta (2 ml) | 100 |
| Provette di raccolta prive di RNasi (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Fornire un ambiente per la lisi e il legame.
Buffer RW:Rimuovere le proteine residue e altre impurità.
DdH2O privo di RNasi:Eluire il DNA/RNA dalla membrana nella colonna spin.
Colonne di RNA FastPure:Assorbono specificamente DNA/RNA.
Provette di raccolta da 2 ml:Raccogliere il filtrato.
Provette per prelievi prive di RNasi da 1,5 ml:Raccogliere DNA/RNA.
Applicazioni
Tamponi nasofaringei, tamponi ambientali, surnatanti di colture cellulari e surnatanti di omogeneizzati di tessuti.
Mater autopreparatoials
Puntali per pipette privi di RNasi, provette da centrifuga prive di RNasi da 1,5 ml, centrifuga, miscelatore vortex e pipette.
Processo dell'esperimento
Eseguire tutti i passaggi seguenti in una cabina di biosicurezza.
1. Aggiungere 200 μl di campione in una provetta da centrifuga priva di RNasi (riempire con PBS o NaCl allo 0,9% in caso di campione insufficiente), aggiungere 500 μl di tampone VL, miscelare bene agitando nel vortex per 15 – 30 secondi e centrifugare brevemente per raccogliere il composto sul fondo del tubo.
2. Posizionare le colonne di RNA FastPure in provette di raccolta da 2 ml.Trasferire la miscela dalla fase 1 alle colonne FastPure RNA, centrifugare a 12.000 giri/min (13.400 × g) per 1 minuto ed eliminare il filtrato.
3. Aggiungere 600 μl di tampone RW alle colonne FastPure RNA, centrifugare a 12.000 giri/min (13.400 × g) per 30 secondi ed eliminare il filtrato.
4. Ripetere il passaggio 3.
5. Centrifugare la colonna vuota a 12.000 giri/min (13.400 × g) per 2 minuti.
6. Trasferire con attenzione le colonne di RNA FastPure in nuove provette di raccolta da 1,5 ml prive di RNasi (fornite nel kit) e aggiungere 30 – 50 μl di ddH2O privo di RNasi al centro della membrana senza toccare la colonna.Lasciare riposare a temperatura ambiente per 1 minuto e centrifugare a 12.000 giri/min (13.400 × g) per 1 minuto.
7. Eliminare le colonne di RNA FastPure.Il DNA/RNA può essere utilizzato direttamente per analisi successive o conservato a -30~-15°C per un breve periodo o a -85~-65°C per un periodo più lungo.
Appunti
Solo per uso di ricerca.Da non utilizzare in procedure diagnostiche.
1. Equilibrare anticipatamente i campioni a temperatura ambiente.
2. I virus sono altamente contagiosi.Assicurati che tutte le precauzioni di sicurezza necessarie siano prese prima dell'esperimento.
3. Evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti del campione, poiché ciò potrebbe portare alla degradazione o alla riduzione della resa del DNA/RNA virale estratto.
4. L'attrezzatura preparata autonomamente comprende puntali per pipette privi di RNasi, provette per centrifuga da 1,5 ml prive di RNasi, centrifuga, miscelatore vortex e pipette.
5. Quando si utilizza il kit, indossare un camice da laboratorio, guanti in lattice monouso e una maschera monouso e utilizzare materiali di consumo privi di RNasi per ridurre al minimo il rischio di contaminazione da RNasi.
6. Eseguire tutti i passaggi a temperatura ambiente se non diversamente specificato.
Meccanismo e flusso di lavoro
