5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

N. cat.: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) è una miscela altamente stabile basata su sonda a tubo singolo, adatta per la trascrizione inversa one-step e la PCR quantitativa (qRT-PCR).Supporta la premiscelazione di primer e sonde e rimane stabile dopo un lungo periodo di conservazione a bassa temperatura.Il campione da testare può essere aggiunto direttamente durante l'uso, senza ulteriori operazioni di apertura/pipettaggio della provetta.Questo prodotto fornisce componenti, ad esempio DNA polimerasi hot-start, M-MLV, uracile DNA glicosilasi termolabile (TS-UNG), inibitore della RNasi, MgCl₂, dNTP (con dUTP invece di dTTP) e stabilizzatori.Con la trascrittasi inversa e la DNA polimerasi ad amplificazione rapida geneticamente modificate è possibile completare l'amplificazione PCR entro 20-40 minuti.Questo reagente utilizza un tampone speciale per qPCR con enzimi misti di enzima di amplificazione anti-inibitoria e enzima UNG.Pertanto, può ottenere una buona amplificazione dei geni bersaglio e prevenire la falsa amplificazione causata dai residui della PCR e dall'inquinamento da aerosol.Questo reagente è compatibile con la maggior parte degli strumenti PCR quantitativi a fluorescenza di produttori come Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad e Roche.

Componente

1.25×Mix Neoscript Fast RTase/UNG

2.5×Buffer premiscelato Neoscript Fast RT (dUTP)

Condizioni di archiviazione

Tutti i componenti devono essere conservati a -20 ℃ per la conservazione a lungo termine e a 4 ℃ per un massimo di 3 mesi.Si prega di mescolare accuratamente dopo lo scongelamento e di centrifugare prima dell'uso.Evitare frequenti fenomeni di congelamento-scongelamento.

Preparazione del sistema di reazione qRT-PCR

1) a.La concentrazione finale del primer è solitamente 0,2μM.Per risultati migliori, la concentrazione del primer può essere ottimizzata nell'intervallo 0,2-1μM.In generale, la concentrazione della sonda può essere ottimizzata nell'intervallo 0,1-0,3μM.

2) b.Quando si utilizza una procedura PCR veloce, l'aumento della concentrazione di primer e sonde può portare a risultati di amplificazione migliori e il loro rapporto deve essere ottimizzato di conseguenza.

3) Diversi tipi di campioni contengono diversi tipi e contenuti di inibitori e numero di copie del gene bersaglio.Il volume del campione deve essere considerato in base alle condizioni effettive.Se necessario, diluire il campione con acqua priva di nucleasi o tampone TE.

Reazione Ccondizioni

Controllo di qualità

1.Rilevazione delle funzioni: sensibilità, specificità e ripetibilità della qPCR.

2.Nessuna attività nucleasica esogena: nessun inquinamento da endonucleasi ed esonucleasi esogena.

Appunti

1.La velocità di amplificazione della DNA polimerasi rapida non è inferiore a 1kb/10s.Diversi strumenti per PCR hanno velocità di riscaldamento e raffreddamento, modalità di controllo della temperatura e conduttività termica diverse, quindi è essenziale ottimizzare la concentrazione di primer/sonda e il metodo di esecuzione in combinazione con il tuo specifico strumento per PCR veloce.

2.Questo prodotto offre un'ampia applicabilità ed è adatto per la diagnosi molecolare ad alta sensibilità.Il metodo PCR in tre fasi è consigliato per primer con bassa temperatura di ricottura o per l'amplificazione di frammenti lunghi superiori a 200 bp.

3.Poiché diversi ampliconi hanno una diversa efficienza di utilizzo del dUTP e una diversa sensibilità a UNG, i reagenti devono essere ottimizzati se la sensibilità di rilevamento diminuisce quando si utilizza il sistema UNG.Vi preghiamo di contattarci per supporto tecnico, se necessario.

4.Per evitare l'amplificazione dei prodotti PCR carry over, per l'amplificazione sono necessarie un'area sperimentale e una pipetta dedicate.Operare con i guanti e cambiarli frequentemente e non aprire la provetta PCR dopo l'amplificazione.