Kit ELISA CHO HCP
In questo test viene utilizzato un metodo ELISA immunoassorbente monofase.I campioni contenenti CHOK1 HCP reagiscono simultaneamente con l'anticorpo anti-CHOK1 di capra marcato con HRP e con l'anticorpo anti-CHOK1 rivestito sulla piastra ELISA, formando infine un complesso sandwich di anticorpo in fase solida e anticorpo marcato con HCP.L'antigene-anticorpo non legato può essere rimosso lavando la piastra ELISA.Il substrato TMB viene aggiunto al pozzetto per una reazione sufficiente.Lo sviluppo del colore viene interrotto dopo l'aggiunta della soluzione bloccante e il valore OD o assorbanza della soluzione di reazione a 450/650 nm viene letto con un lettore di micropiastre.Il valore OD o valore di assorbanza è proporzionale al contenuto di HCP nella soluzione.Da ciò è possibile calcolare la concentrazione di HCP nella soluzione secondo la curva standard.
Applicazione
Questo kit viene utilizzato per rilevare quantitativamente il contenuto di residui proteici della cellula ospite CHOK1 nei campioni.
Ccomponenti
| S/N | Componente | Concentrazione | Condizioni di archiviazione |
| 1 | CHOK1 Standard HCP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, proteggere dalla luce |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, proteggere dalla luce |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Interrompere la soluzione | NA | RT |
| 6 | Sigillatrici per micropiastre | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Piastre di pre-rivestimento ad alto assorbimento | NA | 2-8 ℃ |
Attrezzatura richiesta
| Materiali di consumo/Attrezzature | Produzione | Catalogare |
| Lettore di micropiastre | Dispositivi molecolari | Spectra Max M5, M5e o equivalente |
| Bimby | Eppendorf | Eppendorf/5355 o equivalente |
| Miscelatore a vortice | IKA | MS3 digitale o equivalente |
Conservazione e stabilità
1.Trasporto a -25~-15°C.
2.Le condizioni di conservazione sono quelle mostrate nella Tabella 1;i componenti 1-2 sono conservati a ≤–20°C,5-6 sono conservati a temperatura ambiente,3、4、7、8 vengono conservati a 2-8℃;il periodo di validità è di 12 mesi.
Parametri del prodotto
1.Sensibilità: 1 ng/ml
2.Intervallo di rilevamento: 3-100 ng/ml
3.Precisione: CV intra-analisi ≤ 10%, CV intra-analisi ≤ 15%
4.Copertura degli operatori sanitari: >80%
5.Specificità: questo kit è universale poiché reagisce specificamente con CHOK1 HCP indipendentemente dal processo di purificazione.
Preparazione dei reagenti
1.PBST 0,05%
Prelevare 15 ml di 20×PBST 0,05%, diluito in ddH2O, e portato a 300 ml.
2.1,0% della superficie corporea
Prelevare 1 g di BSA dal flacone e diluire in 100 ml di PBST 0,05%, mescolare bene fino a completa dissoluzione e conservare a 2-8°C.Il tampone di diluizione preparato è valido per 7 giorni.Si consiglia di prepararlo secondo necessità.
3.Soluzione di rilevamento 2μg/mL
Prendere 48μL di 0,5 mg/mL di Anti-CHO HCP-HRP e diluirli in 11.952μL di BSA all'1% per ottenere una concentrazione finale di soluzione di rilevamento da 2μg/mL.
4.Controllo di qualità e preparazione degli standard HCP CHOK1
| Tubo NO. | Originale | Concentrazione | Volume | 1%BSA | volume totale | Finale |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabella: preparazione del controllo qualità e degli standard
Procedura di analisi
1.Preparare i reagenti come indicato in “Preparazione dei reagenti” sopra.
2.Prendere 50μL di standard, campioni e QC (fare riferimento alla Tabella 3) in ciascun pozzetto, quindi aggiungere 100μL di soluzione di rilevamento (2μg/mL);Coprire la piastra con il sigillante e posizionare la piastra ELISA sul termomixer.Incubare a 500 giri/min, 25±3℃ per 2 ore.
3.Capovolgere la micropiastra nel lavandino ed eliminare la soluzione di rivestimento.Pipettare 300μL di PBST 0,05% in ciascun pozzetto per lavare la piastra ELISA ed eliminare la soluzione, quindi ripetere il lavaggio 3 volte.Capovolgere la piastra su un tovagliolo di carta pulito e asciugare.
4.Aggiungere 100μL di substrato TMB (vedere Tabella 1) in ciascun pozzetto, sigillare la piastra ELISA e incubare al buio a 25±3℃ per 15 minuti.
5.Pipettare 100μL di soluzione di arresto in ciascun pozzetto.
6.Misurare l'assorbanza alla lunghezza d'onda di 450/650 nm con il lettore di micropiastre.
7.Analizzare i dati con SoftMax o software equivalente.Tracciare la curva standard utilizzando un modello di regressione logistica a quattro parametri.
Esempio di curva standard
NOTA: se la concentrazione di HCP nel campione supera il limite superiore della curva standard, è necessario diluirla adeguatamente con tampone di diluizione prima del test.
APPUNTI
La soluzione di arresto è acido solforico 2M, maneggiare con cura per evitare schizzi!
