DNasi I
La DNasi I (desossiribonucleasi I) è un'endodesossiribonucleasi in grado di digerire il DNA a singolo o doppio filamento.Riconosce e scinde i legami fosfodiestere per produrre monodeossinucleotidi o oligodeossinucleotidi a filamento singolo o doppio con gruppi fosfato al terminale 5′ e idrossile al terminale 3′.L'attività della DNasi I dipende dal Ca2+ e può essere attivata da ioni metallici bivalenti come Mn2+ e Zn2+.5 mM di Ca2+ proteggono l'enzima dall'idrolisi.In presenza di Mg2+, l'enzima potrebbe riconoscere e scindere casualmente qualsiasi sito su qualsiasi filamento di DNA.In presenza di Mn2+, i doppi filamenti di DNA possono essere riconosciuti simultaneamente e tagliati quasi nello stesso sito per formare frammenti di DNA con estremità piatte o frammenti di DNA con estremità appiccicose con 1-2 nucleotidi sporgenti.
Proprietà del prodotto
La DNasi I del pancreas bovino è stata espressa nel sistema di espressione del lievito e purificata.
Ccomponenti
| Componente | Volume | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNasi I, privo di RNasi | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×tampone DNasi I | 1 ml | 1 ml | 5×1 ml | 5×10 ml |
Trasporto e stoccaggio
1. Stabilità di conservazione: – 15℃~-25℃ per la conservazione;
2.Stabilità del trasporto: trasporto sotto banchi di ghiaccio;
3. Fornito in: Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% glicerolo, pH 7,6 a 25 ℃.
Definizione di unità
Una unità è definita come la quantità di enzima che degrada completamente 1 µg di DNA pBR322 in 10 minuti a 37°C.
Controllo di qualità
RNasi:5U di DNasi I con 1,6 μg di RNA MS2 per 4 ore a 37 ℃ non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Batterico Endotossina:Test LAL, secondo la Farmacopea Cinese IV edizione 2020, metodo del test del limite del gel, regola generale (1143).Il contenuto di endotossine batteriche deve essere ≤10 EU/mg.
Istruzioni per l'uso
1.Preparare la soluzione di reazione nella provetta RNasi-free secondo le proporzioni elencate di seguito:
| Componente | Volume |
| RNA | Xμg |
| 10 × Tampone DNasi I | 1 ml |
| DNasi I, priva di RNasi (5U/μL) | 1 U per μg di RNA |
| DDH2O | Fino a 10 µl |
2,37 ℃ per 15 minuti;
3.Aggiungere il tampone di terminazione per arrestare la reazione e riscaldare a 65 ℃ per 10 minuti per inattivare la DNasi I. Il campione può essere utilizzato direttamente per il successivo esperimento di trascrizione.
Appunti
1.Utilizzare 1U DNasi I per μg di RNA oppure 1U DNasi I per meno di 1μg di RNA.
2. L'EDTA deve essere aggiunto a una concentrazione finale di 5 mM per proteggere l'RNA dalla degradazione durante l'inattivazione dell'enzima.
