Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
N. cat.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) è un kit PCR quantitativo multiplex basato sull'RNA come modello.Nel corso dell'esperimento, la trascrizione inversa e la PCR quantitativa sono state eseguite nella stessa provetta, il che ha semplificato l'operazione sperimentale e ridotto il rischio di contaminazione.In questo kit, il cDNA del primo filamento è stato sintetizzato in modo efficiente dalla trascrittasi inversa resistente al calore e amplificato quantitativamente dalla DNA polimerasi HotStart Tag.Il kit contiene principalmente tampone MP ottimizzato, miscela di enzimi, ecc. La soluzione tampone contiene già Mg2+e dNTP.Inoltre, vengono aggiunti i fattori che possono inibire efficacemente l'amplificazione della PCR non specifica e migliorare l'efficienza di amplificazione di più reazioni qPCR, che possono garantire l'efficienza di amplificazione ed eseguire fino a reazioni di amplificazione multiple.Il sistema dUTP/UDG è stato aggiunto per prevenire efficacemente il rischio di contaminazione da aerosol.
Componenti
1. Buffer
2. Miscela di enzimi
Specifica
| Inizio caldo | Avvio a caldo integrato |
| Metodo di rilevamento | Rilevamento della sonda primer |
| Metodo PCR | RT-qPCR in un unico passaggio |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi |
| Tipo di campione | DNA |
Condizioni di archiviazione
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a -25~-15℃ per 1 anno.Dovrebbe evitare frequenticongelare-scongelare.Si consiglia di salvare separatamente.
Istruzioni
1.Reazione Sistema
| Componenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 2 × buffer MP | 12.5 | 1× |
| Miscela di enzimi | 1 | - |
| Miscela primer/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Modello RNA | 1-10 | - |
| H2O libera da RNasi | a 25 | - |
Appunti:
Assicurarsi di mescolare bene prima dell'uso, evitare bolle eccessive causate da vibrazioni violente.
UN.Concentrazione di primer: miscela di primer incluso primer multiplex, a seconda della situazione la concentrazione ottimale di primer potrebbe essere compresa tra 0,1 e 1,0μM.
B.Concentrazione della sonda: miscela di sonde che include il gruppo fluorescente con differenza di etichettatura della sonda multiplex, a seconda della situazione la concentrazione ottimale della sonda potrebbe essere compresa tra 0,05 e 0,5μM.
C.Diluizione del modello: qPCR è altamente sensibile e si consiglia di diluire il modello.Il valore Ct di controllo è adatto tra 20 e 35.
D.Preparazione del sistema: preparare nel tavolo di lavoro ultra pulito, nella pipettatrice e nella provetta di reazione senza residui di nucleasi;si consiglia di utilizzare la testa della pistola con elemento filtrante.Evitare la contaminazione incrociata e la contaminazione da aerosol.
2. Ciclismo ottimizzatoProtocollo
| Ciclo fare un passo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Trascrizione inversa | 50℃UN | 20 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Reazione di amplificazione | 95 ℃ | 15 secondi |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 secondi c |
Appunti:
UN.Trascrizione inversa: la temperatura può selezionare 42°C o 50°C.
B.Reazione di amplificazione: La temperatura viene regolata in base al valore Tm dei primer progettati.
C.Acquisizione del segnale di fluorescenza: impostare la procedura sperimentale in base ai requisiti del manuale dello strumento.
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza.
