Premiscela sonda qPCR multiplex
N. cat.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (basato su coloranti) è una pre-soluzione per l'amplificazione PCR quantitativa in tempo reale 2 × caratterizzata da elevata sensibilità e specificità, che è di colore blu e ha l'effetto dell'aggiunta di campione.Questo prodotto è un reagente premiscelato 2× Mix che consente fino a quattro reazioni PCR quantitative fluorescenti in un singolo pozzetto di reazione.Questo prodotto contiene il metodo anticorpale geneticamente modificato per avviare l'enzima Taq a caldo, migliorando notevolmente la sensibilità e la specificità dell'amplificazione.Allo stesso tempo, questo prodotto ha ottimizzato profondamente il tampone multi-reazione, che può migliorare l'efficienza di amplificazione della reazione e promuovere l'amplificazione efficace di modelli a bassa concentrazione.Questo prodotto può essere utilizzato per la genotipizzazione e l'analisi quantitativa multiplex.
Specifica
| Inizio caldo | Avvio a caldo integrato |
| Metodo di rilevamento | Rilevamento della sonda primer |
| Metodo PCR | qPCR |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi |
| Tipo di campione | DNA |
Condizioni di archiviazione
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a -25~-15℃ per 2 anni.
Istruzioni
1. ReazioneSistema
| Componenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 2× Miscela master qPCR multiplex TaqMan | 12.5 | 1× |
| Miscela di primer (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/l |
| Miscela sonda (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/l |
| Colorante di riferimento Rox | 0,5 | 1× |
| Modello DNA/cDNA | 1-10 | - |
| DDH2O | fino a 25 | - |
Appunti:Mescolare accuratamente prima dell'uso per evitare bolle eccessive dovute a un'agitazione vigorosa.
UN.Concentrazione di primer: la miscela di primer contiene più coppie di primer, solitamente ciascun primer ha una concentrazione finale di 0,2 μmol/L e può anche essere regolata tra 0,1 e 0,5 μmol/L, a seconda dei casi.
B.Concentrazione della sonda: la miscela della sonda contiene più sonde con diversi segnali di fluorescenza e la concentrazione di ciascuna sonda può essere regolata tra 50 e 250 nmol/L in base alla situazione specifica.
1.Riferimento colorante Rox: viene utilizzato su strumenti di amplificazione PCR Real Time come Applied Biosystems per correggere l'errore del segnale di fluorescenza generato tra i pozzetti;questo prodotto non contiene il riferimento al colorante Rox.Se necessario, si consiglia Cas#10200.
2.Diluizione del modello: qPCR è altamente sensibile e si consiglia di diluire il modello per l'uso.Se il modello è una soluzione madre di cDNA, il volume del modello non deve superare 1/10 del volume totale.
3.Sistema di reazione: si consigliano 25μL, 30μL o 50 μL per garantire l'efficacia e la ripetibilità dell'amplificazione del gene target.
4.Preparazione del sistema: prepararsi sul banco super pulito e utilizzare puntali e provette di reazione senza residui di nucleasi;si consiglia di utilizzare i puntali con cartucce filtranti.Evitare la contaminazione incrociata e la contaminazione da aerosol.
2.Programma di reazione
| Passo del ciclo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 15 secondi | 45 |
| Ricottura/Estensione | 60 ℃ | 30 secondi |
Appunti:
1.Ricottura/Estensione: La temperatura e il tempo possono essere opportunamente regolati in base al valore Tm del primer progettato.
2.Acquisizione del segnale di fluorescenza: il tempo di acquisizione del segnale di fluorescenza richiesto per i diversi strumenti di rilevamento qPCR è diverso, impostare in base al limite di tempo minimo.Il tempo di diversi strumenti comuni è impostato come segue:
20 secondi: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Veloce
31 secondi: Applied Biosystems 7300
32 secondi: Applied Biosystems 7500
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
