Premiscela Multiplex One Step RT-qPCR
Descrizione
N. cat.: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix è un kit PCR quantitativo multiplex basato sull'RNA come modello.Nell'esperimento, la trascrizione inversa e la PCR quantitativa vengono eseguite nella stessa provetta di reazione, semplificando l'operazione sperimentale e riducendo il rischio di contaminazione.Il design unico del tampone e della miscela enzimatica può essere utilizzato in un sistema liofilizzato monofase.Il kit utilizza la trascrittasi inversa resistente al calore per la sintesi efficiente del cDNA del primo filamento utilizzando la Taq DNA polimerasi hotstart per l'amplificazione quantitativa.Contiene un tampone di reazione ottimizzato, una miscela di enzimi ecc. e sono stati aggiunti fattori che inibiscono efficacemente l'amplificazione PCR non specifica e migliorano l'efficienza di amplificazione di più reazioni qPCR, consentendo l'amplificazione quantitativa di fluorescenza multipla garantendo al tempo stesso l'efficienza di amplificazione dei primer.
Componenti
| Nome |
| 1. Tampone liofilo |
| 2. Miscela lioenzimatica |
| 3. Protettivo liofilizzato |
Condizioni di trasportoione
A: Tampone liofilo e protettivo: -25~-15℃, la durata di conservazione è di 1 anno.
B: Miscela lioenzimatica, 2-8 ℃, durata di conservazione 6 mesi.
Istruzioni per il funzionamento
1. Sistema di reazione (prendere 25μL come esempio)
| Componenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| Lyo-Buffer | 6 | 1* |
| Miscela lioenzimatica | 1 | - |
| Lyo-Protettivo | 8 | - |
| Miscela di primer (10μM) | 1 | 0,1-1 µM |
| Miscela sonda (10μM) | 0,5 | 0,05-0,5 µM |
| Modello di RNA | 5 | - |
| DEPCH2O | Fino a 25 | - |
2. Protocollo ciclistico ottimizzato
1) Protocollo ciclistico standard
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°Ca | 10 minuti | 1 |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 5 minuti | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C | 15 secondi | 45 cicli |
| 60°Cb | 30 secondic |
2) Protocollo di ciclismo veloce
|
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°Ca | 2 minuti | 1 |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 2 secondi | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C | 1 secondo |
45 cicli |
| 60°Cb | 13 secondic |
Nota:
a) Inversione trascrizione: La temperatura può selezionare 42°C o 50°C per 10-15 minuti.
b) Reazione di amplificazione: La temperatura viene regolata in base al valore Tm dei primer progettati.
C)Fluorescenza segnale acquisizione: Impostare la procedura sperimentale in base ai requisiti delmanuale dello strumento.
Informazioni/Specifiche tecniche
| Inizio caldo | Avvio a caldo integrato |
| Metodo di rilevamento | Rilevamento della sonda primer |
| Metodo PCR | RT-qPCR in un unico passaggio |
| Tipo di campione | RNA |
Appunti
1. Questo prodotto è solo per uso di ricerca.
2. Indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
