Sonda RT-qPCR One Step Fast Premix-UNG
N. cat.: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) è un kit di rilevamento rapido RT-qPCR basato su sonda adatto per PCR quantitativa single-plex o multiplex utilizzando l'RNA come modello (come il virus RNA).Questo prodotto utilizza una nuova generazione di Taq DNA polimerasi modificata con anticorpi e trascrittasi inversa dedicata in un unico passaggio, con un tampone ottimizzato per un'amplificazione rapida, che ha una velocità di amplificazione più rapida, una maggiore efficienza e specificità di amplificazione.Supporta l'amplificazione bilanciata sia in single-plex che in multiplex di campioni a bassa e alta concentrazione in breve tempo.
Componenti
1. Tampone 5×RT-qPCR (U+)
2. Miscela di enzimi (U+)
Appunti:
UN.Il tampone 5×RT-qPCR (U+) include dNTP e Mg2+;
B.La miscela enzimatica (U+) comprende trascrittasi inversa, Hot Start Taq DNA polimerasi, inibitore della RNasi e UDG;
C.Utilizzare puntali RNase-Free, provette EP, ecc.
Prima dell'uso, mescolare accuratamente il buffer 5×RT-qPCR (U+).Se si verifica qualche precipitazione dopo lo scongelamento, attendere che il tampone ritorni a temperatura ambiente, mescolare e sciogliere, quindi utilizzarli normalmente.
Condizioni di archiviazione
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a -25~-15℃ per 1 anno.
Istruzioni
1. Reazione Sistema
| Componenti | Volume (20μL reazione) |
| 2 buffer RT-qPCR | 4μL |
| Miscela di enzimi (U+) | 0,8μL |
| Primer in avanti | 0,1 ~ 1,0μM |
| Primer inverso | 0,1 ~ 1,0μM |
| Sonda TaqMan | 0,05~0,25μM |
| Modello | X µl |
| Acqua priva di RNasi | fino a 25μL |
Note: il volume della reazione è 10-50μL.
2. Protocollo ciclistico (Snorma)
| Ciclo fare un passo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Trascrizione inversa | 55 ℃ | 10 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 30 secondi | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 10 secondi | 45 |
| Ricottura/Estensione | 60 ℃ | 30 secondi |
| Protocollo ciclistico (Veloce) Ciclo fare un passo |
Temp. |
Tempo |
Cicli |
| Trascrizione inversa | 55 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 secondi | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 3 secondi | 43 |
| Ricottura/Estensione | 60 ℃ | 10 secondi |
Appunti:
UN.La temperatura di trascrizione inversa è compresa tra 50 ℃ e 60 ℃, l'aumento della temperatura aiuta ad amplificare strutture complesse e modelli ad alto contenuto di CG;
B.La temperatura di ricottura ottimale deve essere regolata in base al valore Tm del primer e selezionare il tempo più breve per la raccolta del segnale di fluorescenza in base allo strumento Real Time PCR.
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
