Premiscela verde SYBR RT-qPCR monofase
N. cat.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix è destinato alla quantificazione della fluorescenza basata sul colorante SYBR Green I.Utilizzando primer gene-specifici, le reazioni di trascrizione inversa e qPCR vengono completate in un'unica provetta, eliminando la necessità di ripetute operazioni di apertura del tappo e pipettaggio, migliorando notevolmente l'efficienza del test e riducendo il rischio di contaminazione.Per i campioni di RNA, il kit utilizza la trascrittasi inversa resistente al calore per un'efficiente sintesi del cDNA e la HotStart Taq DNA polimerasi per l'amplificazione quantitativa.Con il sistema tampone ottimizzato, la sensibilità del kit può arrivare fino a 0,1 pg per target altamente espressi e fino a 1 pg per target moderatamente espressi.Il kit è adatto per l'amplificazione e la quantificazione di campioni di DNA.Consente il rilevamento sensibile e la quantificazione degli acidi nucleici provenienti da diversi campioni vegetali e animali, cellule e microrganismi.
Componenti
| No | Nome | Volume | Volume |
| 1 | Buffer avanzato | 250 µl | 2×1,25 ml |
| 2 | Miscela di enzimi avanzata | 20 µl | 200 µl |
| 3 | RNasi libera H2O | 250 µl | 2×1,25 ml |
Condizioni di archiviazione
Questo prodotto deve essere conservato a -25~-15℃ lontano dalla luce per 1 anno.
Istruzioni
1.Configurazione del sistema di reazioned
| Componenti | Volume (μL) | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| Buffer avanzato | 12.5 | 25 | 1× |
| Miscela di enzimi avanzata | 1 | 2 | - |
| Primer avanzato (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Primer inverso (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Piastra per RNAb | X | X | - |
| RNasi libera H2Oc | a 25 | a 50 | - |
Appunti:
1) un.TLa concentrazione finale del primer era di 0,2 μmol/L, che poteva anche essere regolata tra 0,1 e 1 μmol/L, a seconda dei casi.
2) b.Il reagente è estremamente sensibile, con RNA totale compreso tra 1 pg e 1 μg, e l'analisi di campioni umani ha mostrato un input ottimale di 1 pg-100 ng, controllando un valore Ct complessivo compreso tra 15 e 30, a seconda dei casi.
3) c.Si consiglia di utilizzare 20μL o 50μL per garantire la validità e la riproducibilità dell'amplificazione del gene target.
4) d.Si prega di preparare nel banco ultra-pulito e utilizzare puntali e provette di reazione privi di residui di nucleasi;si consigliano puntali con cartucce filtranti.Evitare la contaminazione incrociata e la contaminazione da aerosol.
2.Programma di reazione
| Passo del ciclo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Trascrizione inversa | 50℃a | 6 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Reazione di amplificazione | 95 ℃ | 15 secondi | 40 |
| 60 ℃b | 30 secondi | ||
| Fase della curva di fusione | Impostazioni predefinite dello strumento | 1 | |
Appunti:
1) un.La temperatura di trascrizione inversa può essere selezionata tra 50-55°C a seconda delle esigenze sperimentali.Per i campioni di DNA, il processo di trascrizione inversa può essere omesso.
2) b.In casi particolari la temperatura di ricottura/estensione può essere regolata in base al valore Tm del primer, si consiglia 60°C.
Appunti
1. Questo prodotto è solo per uso di ricerca.
2. Si prega di operare con camici da laboratorio e guanti monouso, per la vostra sicurezza.
