Inibitore della rnasi
L'inibitore della RNasi murina è un inibitore ricombinante della RNasi murina espresso e purificato da E.coli.Si lega alla RNasi A, B o C in un rapporto 1:1 attraverso un legame non covalente, inibendo così l'attività dei tre enzimi e proteggendo l'RNA dalla degradazione.Tuttavia, non è efficace contro RNasi 1, RNasi T1, S1 Nucleasi, RNasi H o RNasi da Aspergillus.L'inibitore della RNasi murino è stato testato mediante RT-PCR, RT-qPCR e mRNA IVT ed è risultato compatibile con varie trascrittasi inverse commerciali, DNA polimerasi e RNA polimerasi.
Rispetto agli inibitori della RNasi umani, l'inibitore della RNasi murino non contiene due cisteine che sono altamente sensibili all'ossidazione che causa l'inattivazione dell'inibitore.Ciò lo rende stabile a basse concentrazioni di DTT (meno di 1 mM).Questa caratteristica lo rende adatto all'uso in reazioni in cui elevate concentrazioni di DTT sono avverse alla reazione (ad esempio, RT-PCR in tempo reale).
Aapplicazione
Questo prodotto può essere ampiamente utilizzato in qualsiasi esperimento in cui è possibile l'interferenza dell'RNasi per evitare la degradazione dell'RNA, come ad esempio:
1.Sintesi del primo filamento di cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ecc.
2.Protegge l'RNA dalla degradazione durante la trascrizione/traduzione in vitro (ad esempio, il sistema di replicazione virale in vitro).
3.Inibizione dell'attività della RNasi durante la separazione e purificazione dell'RNA.
Condizioni di archiviazione
Il prodotto può essere conservato a -25～- 15 ℃, valido per 2 anni.
Buffer di archiviazione
KCl 50 mM, HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6, 25 ℃), DTT 8 mM e glicerolo al 50%.
Definizione di unità
La quantità di inibitore della RNasi murino richiesta per inibire l'attività di 5 ng di ribonucleasi A del 50% è stata definita come una unità (U).
Peso molecolare delle proteine
Il peso molecolare dell'inibitore della RNasi murino è 50 kDa.
Controllo di qualità
Esonucleasi Attività:
40 U di inibitore della RNasi murino con 1 μg di DNA digerito λ -Hind III a 37°C per 16 ore non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Attività dell'endonucleasi:
40 U di inibitore della RNasi murino con 1μ g λ di DNA a 37°C per 16 ore non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Intaccatura Attività:
40U di inibitore della RNasi murino con 1μ g di pBR322 a 37°C per 16 ore non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
RNasi Attività:
40U di inibitore della RNasi murino con 1,6μ g di RNA MS2 per 4 ore a 37°C non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
E.coliDNA:
40 U di inibitore della RNasi murino vengono sottoposti a screening per la presenza di DNA genomico di E. coli utilizzando TaqMan qPCR con primer specifici per il locus 16S rRNA di E. coli.La contaminazione del DNA genomico di E. coli è ≤ 0,1 pg/40 U.
Nnotas
1. L'oscillazione o l'agitazione violenta porterà all'inattivazione dell'enzima.
2. L'intervallo di temperatura ottimale di questo inibitore era 25-55 ℃ ed è stato inattivato a 65 ℃ e oltre.
3.Le attività di RNasi H, RNasi 1 e RNasi T1 non sono state inibite dall'inibitore murino della RNasi.
4.L'inibizione dell'attività della RNasi è stata riscontrata in un ampio intervallo di pH (i pH 5-9 erano tutti attivi) e l'attività massima è stata osservata a pH 7-8.
5.Poiché le ribonucleasi tipicamente mantengono l'attività in condizioni di denaturazione, è necessario prestare attenzione per evitare di denaturare le molecole di inibitori della RNasi che si sono complessate con una ribonucleasi.Per prevenire il rilascio della ribonucleasi attiva, dovrebbero essere evitate temperature superiori a 50 °C e alte concentrazioni di urea o altri agenti denaturanti.
