Ultranucleasi
UltraNuclease è un'endonuclaese geneticamente modificata derivata da Serratia marcescens, in grado di degradare DNA o RNA, a doppio o singolo filamento, lineare o circolare in un'ampia gamma di condizioni, degradare completamente gli acidi nucleici in oligonucleotidi 5'-monofosfato con lunghezza 3-5 basi .Dopo la modifica dell'ingegneria genetica, il prodotto è stato fermentato, espresso e purificato in Escherichia coli (E. coli), che riduce la viscosità del surnatante cellulare e del lisato cellulare nella ricerca scientifica, ma migliora anche l'efficienza di purificazione e la ricerca funzionale delle proteine.Può anche essere utilizzato nella terapia genica, nella purificazione dei virus, nella produzione di vaccini, nell'industria farmaceutica di proteine e polisaccaridi come reagente per la rimozione dell'acido nucleico dei residui dell'ospite.
Caratteristiche del prodotto
| N. CAS | 9025-65-4 |
| CE n. | |
| Peso molecolare | 30kDa |
| Punto isoelettrico | 6,85 |
| Purezza delle proteine | ≥99%（SDS-PAGE E SEC-HPLC） |
| Attività specifica | ≥1.1×106U/mg |
| Temperatura ottimale | 37°C |
| pH ottimale | 8.0 |
| Attività della proteasi | negativo |
| Carico biologico | <10CFU/100.000U |
| Proteina residua della cellula ospite | ≤10 ppm |
| Metallo pesante | ≤10 ppm |
| Endotossina batterica | <0,25UE/1000U |
| Buffer di archiviazione | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% glicerolo |
Condizioni di archiviazione
≤0°C di trasporto;-25~-15°C Conservazione, validità di 2 anni (evitare il congelamento-scongelamento).
Definizione di unità
La quantità di enzima utilizzata per modificare il valore di assorbimento di △A260 di 1,0 entro 30 minuti a 37 °C, pH 8,0, equivalente a 37μg di DNA di sperma di salmone digerito mediante taglio in oligonucleotidi, è stata definita come unità attiva (U).
Controllo di qualità
Proteina residua della cellula ospite: Kit ELISA
•Proteasi Residui: 250KU/mL UltraNuclease ha reagito con il substrato per 60 minuti, non è stata rilevata alcuna attività.
•Endotossina batterica: LAL-Test, Metodo di test del limite del gel della Farmacopea della Repubblica popolare cinese volume 4 (edizione 2020).Regole generali (1143).
•Carico biologico: Farmacopea della Repubblica popolare cinese Volume 4 (Edizione 2020)— Generale
Regole per il test di sterilità (1101), standard nazionale PRC, GB 4789.2-2016.
•Metalli pesanti:ICP-AES, HJ776-2015.
Operazione
L'attività dell'UltraNucleasi è stata significativamente inibita quando la concentrazione di SDS era superiore allo 0,1% o EDTA
la concentrazione era superiore a 1 mM. Il tensioattivo Triton X- 100, Tween 20 e Tween 80 non ha avuto alcun effetto sulla nucleasi
proprietà quando la concentrazione era inferiore all'1,5%.
| Operazione | Funzionamento ottimale | Operazione valida |
| Temperatura | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mm | 1-15 mm |
| digitale terrestre | 0-100 mm | >100 mm |
| 2-mercaptoetanolo | 0-100 mm | >100 mm |
| Ione metallico monovalente （Na+, K+ ecc.） | 0-20 mm | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mm | 0-100 mm |
Utilizzo e dosaggio
• Rimuovere l'acido nucleico esogeno dai prodotti vaccinali, ridurre il rischio di tossicità residua dell'acido nucleico e migliorare la sicurezza del prodotto.
• Ridurre la viscosità del liquido di alimentazione causata dall'acido nucleico, abbreviare i tempi di lavorazione e aumentare la resa proteica.
• Rimuovere l'acido nucleico che avvolge la particella (virus, corpo incluso, ecc.), che è favorevole
al rilascio e alla purificazione della particella.
| Tipo sperimentale | Produzione di proteine | Virus, vaccino | Farmaci cellulari |
| Numero di celle | Peso umido della cella da 1 g (risospeso con tampone da 10 ml) | Fermentazione 1L surnatante liquido | coltura da 1 litro |
| Dosaggio minimo | 250U | 100U | 100U |
| Dosaggio consigliato | 2500U | 25000U | 5000U |
• Il trattamento con nucleasi può migliorare la risoluzione e il recupero del campione per la cromatografia su colonna, l'elettroforesi e l'analisi blotting.
• Nella terapia genica, l'acido nucleico viene rimosso per ottenere virus adeno-associati purificati.
