Enzimi UDG/UNG
L'UDG (uracile DNA glicosilasi) può catalizzare l'idrolisi del collegamento N-glicosidico tra la base uracile e lo scheletro zucchero-fosfato in ssDNA e dsDNA.Può controllare facilmente l'inquinamento da aerosol ed è adatto per i comuni sistemi di biologia molecolare come PCR, qPCR, RT-qPCR e LAMP.
Specifiche
| Host di espressione | E. coli ricombinante con il gene della glicosilasi del DNA dell'uracile |
| Peso molecolare | 24.8kDa |
| Purezza | ≥95% (PAGINA SDS) |
| Inattivazione del calore | 95℃, 5~10 minuti |
| Definizione di unità | Una unità (U) è definita come la quantità di enzima necessaria per catalizzare l'idrolisi di l μg di dsDNA contenente dU in 30 minuti a 25 ℃. |
Magazzinaggio
Il prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25℃~-15°C per due anni.
Istruzioni
1.Preparazione della miscela di reazione PCR secondo il seguente sistema
| Componenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 10×tampone PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 mmol/lisciazione) | 1 | 0,2 mmol/liscicazione |
| DNA modello | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Taq DNA polimerasi (5 U/μL) | 0,5 | 0,05 U/μL |
| Uracile DNA glicosilasi (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Fino a 50 | - |
Nota: In base ai requisiti sperimentali, la concentrazione finale di dUTP può essere regolata tra 0,2-0,6 mmol/L e si possono aggiungere selettivamente 0,2 mmol/L di dTTP.
2.Procedura di amplificazione
| Passo del ciclo | Temperatura | Tempo | Cicli |
| Degradazione del modello contenente dU | 25 ℃ | 10 minuti | 1 |
| Attivazione UDG, denaturazione iniziale del modello | 95 ℃ | 5~10 minuti | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 10 secondi |
30-35 |
| Ricottura | 60 ℃ | 20 secondi | |
| Estensione | 72℃ | 30 secondi/KB | |
| Proroga finale | 72℃ | 5 minuti | 1 |
Nota: Il tempo di reazione a 25°C può essere regolato entro 5-10 minuti in base ai requisiti sperimentali.
Appunti
1.L'UDG è attivo nella maggior parte dei tamponi di reazione PCR.
2.Gli enzimi devono essere conservati in una ghiacciaia o in un bagno di ghiaccio quando utilizzati e devono essere conservati a -20°C immediatamente dopo l'uso.
3.Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
