Rnase A
La ribonucleasi A (RNasiA) è un polipeptide a filamento singolo contenente 4 legami disolfuro con un peso molecolare di circa 13,7 kDa.RNasi È un'endoribonucleasi che degrada specificamente l'RNA a filamento singolo nei residui C e U.Nello specifico, la scissione riconosce il legame fosfodiestere formato dal ribosio 5' di un nucleotide e il gruppo fosfato sul ribosio 3' del nucleotide pirimidinico adiacente, in modo che i fosfati 2,3'-ciclici vengano idrolizzati nei corrispondenti 3 'fosfati nucleosidici (ad esempio, pG-pG-pC-pA-pG viene scisso dalla RNasi A per generare pG-pG-pCp e A-PG).L'RNasi A è la più attiva nella scissione dell'RNA a filamento singolo.La concentrazione di lavoro consigliata è compresa tra 1 e 100 μ G/mL, compatibile con vari sistemi di reazione.Una bassa concentrazione di sale (0-100 mM NaCl) può essere utilizzata per tagliare RNA a filamento singolo, RNA a doppio filamento e catene di RNA formate dall'ibridazione RNA-DNA.
Tuttavia, ad alta concentrazione di sale (≥0,3 M), l'RNasi A scinde specificamente solo l'RNA a filamento singolo.
L'RNasi A è più comunemente utilizzata per rimuovere l'RNA durante la preparazione del DNA plasmidico o del DNA genomico.Il fatto che la DNasi sia attiva o meno durante il processo di preparazione può facilmente influenzare la reazione.Il metodo tradizionale di bollitura a bagnomaria può essere utilizzato per inattivare l'attività della DNasi.Questo prodotto non contiene DNasi e proteasi e non richiede trattamento termico prima dell'uso.Inoltre, questo prodotto può essere utilizzato anche in esperimenti di biologia molecolare come l'analisi della protezione dell'RNasi e l'analisi della sequenza dell'RNA.
Condizioni di archiviazione
Il prodotto deve essere conservato a -25℃~- 15℃ per 2 anni.
Specifiche
| Aspetto | Polvere |
| Quantità | 100mg/1g |
| Tipologia di prodotto | RNasi A |
Istruzioni
Questo è uno dei metodi comuni per preparare la soluzione di stoccaggio della RNasi A.Può anche essere preparatocon altri metodi secondo i metodi tradizionali in laboratorio o nella letteratura di riferimento (come ad esdirettamente sciogliendo in 10 mM di Tris-HCl, pH 7,5 o soluzione di Tris-NaCl)
1. Utilizzare acetato di sodio 10 mM (pH 5,2) per preparare 10 mg/mL di soluzione di conservazione della RNasi A.
2. Riscaldamento a 100 ℃ per 15 minuti.
3. Raffreddare a temperatura ambiente, aggiungere 1/10 di volume di Tris-HCl 1 M (pH 7,4), regolare il pH a 7,4 (peresempio, aggiungere 500 mL di soluzione di conservazione di RNasi 1 M Tris-HCl da 10 mg/mL, pH 7,4).
4. Sottoconfezionato a -20 ℃ per la conservazione congelata, che può essere stabile fino a 2 anni.
[Appunti]:
Quando si fa bollire la soluzione di RNasi A in condizioni neutre, si formerà la precipitazione di RNasi;Fatelo bollire a un pH più basso e, se c'è precipitazione, si può osservare, che può essere causato dalla presenza di impurità proteiche.Se dopo l'ebollizione si riscontrano sedimenti, le impurità possono essere rimosse mediante centrifugazione ad alta velocità (13.000 giri/min) e quindi sottoconfezionate per la conservazione nel congelamento.
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza.
