2×HiF Taq più Master Mix
N. cat.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (con colorante) è una soluzione premiscelata 2× pronta all'uso contenente Plus HIF DNA polimerasi, dNTP e tampone ottimizzato.Due anticorpi monoclonali a temperatura ambiente che inibiscono l'attività della polimerasi e l'attività dell'esonucleasi 3′→5′ vengono aggiunti alla master mix per una PCR Hot Start semplice e altamente specifica.Il fattore di estensione viene aggiunto alla master mix per conferire all'enzima una capacità di amplificazione dei frammenti lunghi, la lunghezza dell'amplificazione può arrivare fino a 13 kb, l'enzima ha un'attività della DNA polimerasi 5′→3′ e un'attività della DNA polimerasi 3′→5′ attività di esonucleasi, la sua fedeltà è 83 volte quella della Taq DNA polimerasi, che è 9 volte quella della normale DNA polimerasi.È adatto per l'amplificazione di modelli complessi, il prodotto di amplificazione è un'estremità smussata.
2×HIF Taq plus Master Mix (con colorante) presenta i vantaggi di veloce e facile, alta sensibilità, forte specificità, buona stabilità, ecc., il sistema di reazione deve solo aggiungere primer e modelli e può essere amplificato da un due- protocollo step, semplificando le fasi sperimentali e risparmiando tempo.Questo prodotto contiene coloranti indicatori per l'elettroforesi e i prodotti PCR possono essere utilizzati direttamente per l'elettroforesi.Inoltre, il prodotto contiene anche uno specifico agente protettivo, in modo che la master mix possa mantenere un'attività stabile dopo ripetuti cicli di congelamento-scongelamento.
Condizioni di archiviazione
I prodotti devono essere conservati a -25~-15℃ per 1 anno.
Specifiche
| Specifiche di prodotto | Miscela principale |
| Concentrazione | 2× |
| Inizio caldo | Avvio a caldo integrato |
| Sporgenza | Smussare |
| Velocità di reazione | Rapido |
| Taglia (prodotto finale) | Fino a 13kb |
| Condizioni per il trasporto | Ghiaccio secco |
| Tipologia di prodotto | Premiscele per PCR ad alta fedeltà |
Istruzioni
1.Sistema di reazione PCR
| Componenti | Volume (μL) |
| Modello del DNA | Adatto |
| Primer diretto (10 μmol/L) | 2.5 |
| Primer inverso (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq più Master Mix | 25 |
| DDH2O | a 50 |
2.Utilizzo consigliato di diversi modelli
| Tipo di modello | Amplifica frammenti da 1kb a 10 kb |
| DNA genomico | 50ng-200ng |
| DNA plasmidico o virale | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (non superare il 10% del volume finale della reazione PCR) |
3.Protocollo di amplificazione
1) Protocollo in due fasi (modello di complessità)
| Passo del ciclo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 minuti | 1 |
| Denaturazione | 98 ℃ | 10 secondi | 30-35 |
| Estensione | 68℃ | 30 secondi/KB | |
| Proroga finale | 72℃ | 5 minuti | 1 |
2) Protocollo in tre fasi (protocollo normale)
| Passo del ciclo | Temp. | Tempo | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 minuti | 1 |
| Denaturazione | 98 ℃ | 10 secondi | 30-35 |
| Ricottura | 60 ℃ | 20 secondi | |
| Estensione | 72℃ | 30 secondi/KB | |
| Proroga finale | 72℃ | 5 minuti | 1 |
3) Protocollo del gradiente di ricottura (modello di complessità)
| Passo del ciclo | Temperatura | Tempo | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 minuti | 1 |
| Denaturazione | 98 ℃ | 10 secondi | 15 (1℃ di riduzione per ciclo) |
| Ricottura gradiente | 70-55℃ | 20 secondi | |
| Estensione | 72℃ | 30 secondi/KB | |
| Denaturazione | 98 ℃ | 10 secondi |
20 |
| Ricottura | 55 ℃ | 20 secondi | |
| Estensione | 72℃ | 30 secondi/KB | |
| Proroga finale | 72℃ | 5 minuti | 1 |
Funzionalità con protocolli di amplificazione diversi
| Protocollol | Due passi | Tre passi | Ricottura gradiente |
| Spec. | veloce | medio | lento |
| Specificità | alto | medio | alto |
| Resa della PCR | medio | alto | medio |
| Tasso di rilevamento | alto | medio | alto |
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice da laboratorio e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
