BspQI
BspQI può essere espresso in modo ricombinante in E. coli che può riconoscere siti specifici e viene prodotto sotto
BspQI, un'endonucleasi di restrizione dell'endonucleasi di restrizione IIs, deriva da un ceppo ricombinante di E. coli che trasporta il gen BspQI clonato e modificato da Bacillus sphaericus.Può riconoscere siti specifici e la sequenza di riconoscimento e i siti di scissione sono i seguenti:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
caratteristiche del prodotto
1. Alta attività, digestione rapida;
2. Attività a stella bassa, che garantisce un taglio accurato come “bisturi”;
3. Senza BSA e senza origine animale;
Sensibilità alla metilazione
Dsono metilazione:Non sensibile;
Dmetilazione cm:Non sensibile;
Metilazione CpG:Non sensibile;
Condizioni di archiviazione
Il prodotto deve essere spedito a una temperatura ≤ 0℃;Conservare a -25~- 15℃.
Buffer di archiviazione
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitolo 1,0 mM, albumina ricombinante 500 µg/ml, Trition X-100 0,1% e glicerolo 50% (pH 7,0 a 25°C).
Definizione di unità
Un'unità è definita come la quantità di enzima necessaria per digerire 1 µg di DNA di controllo interno in 1 ora a 50°C in un volume di reazione totale di 50 µL.
Controllo di qualità
Saggio della purezza proteica (SDS-PAGE):La purezza di BspQI era ≥95% determinata mediante analisi SDS-PAGE.
RNasi:10U di BspQI con 1,6μg di RNA MS2 per 4 ore a 50°C non producono alcuna degradazione, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Attività della DNasi non specifica:10U di BspQI con 1μg di DNA λ a 50℃ per 16 ore, rispetto a 50℃ per 1 ora, non producono DNA in eccesso, come determinato mediante elettroforesi su gel di agarosio.
Legatura e ritaglio:Dopo la digestione di 1 μg di λDNA con 10U BspQI, i frammenti di DNA possono essere legati con la DNA ligasi T4 a 16ºC.E questi frammenti legati possono essere ritagliati con BspQI.
Escherichia coli DNA: Il rilevamento qPCR TaqMan specifico per l'rDNA di E. coli 16s ha mostrato che il residuo del genoma di E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Residuo proteico ospite:≤ 50 ppm
Batterico Endotossina: Test LAL, secondo la Farmacopea Cinese IV edizione 2020, metodo del test del limite del gel, regola generale (1143).Il contenuto di endotossine batteriche deve essere ≤10 EU/mg.
Sistema e condizioni di reazione
| Componente | Volume |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 ml |
| DNA | 1 mg |
| 10 buffer BspQ I | 5 µl |
| gg H2O | Fino a 50 µl |
Condizioni di reazione: 50 ℃, 1~ 16 ore.
Inattivazione del calore: 80°C per 20 minuti.
Il sistema di reazione e le condizioni consigliati possono fornire un effetto di digestione enzimatica relativamente buono, che è solo di riferimento, fare riferimento ai risultati sperimentali per i dettagli.
Applicazione del prodotto
Digestione con endonucleasi di restrizione, clonazione rapida.
Appunti
1. Il volume dell'enzima ≤ 1/10 del volume di reazione.
2. L'attività stellare può verificarsi quando la concentrazione di glicerolo è superiore al 5%.
3. L'attività di clivaggio può verificarsi quando il substrato è inferiore al rapporto raccomandato.
