Bst 2.0 DNA Polimerasi (senza glicerolo, alta densità)
La Bst DNA polimerasi V2 deriva dalla DNA polimerasi I del Bacillus stearothermophilus, che ha un'attività della DNA polimerasi 5′→3′ e una forte attività di sostituzione della catena, ma nessuna attività di esonucleasi 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 è ideale per lo spostamento del filamento, l'amplificazione isotermica LAMP (amplificazione isotermica mediata da loop) e il sequenziamento rapido.Questa Bst DNA polimerasi V2 è in grado di inibire l'attività della DNA polimerasi a temperatura ambiente, in modo che possa essere utilizzata e il sistema di reazione possa essere formulato a temperatura ambiente, prevenendo l'amplificazione non specifica e migliorando l'efficienza della reazione, e questa versione può essere liofilizzato.Inoltre, è in grado di rilasciare la sua attività a temperature elevate, eliminando così la necessità di una fase di attivazione separata.
Componenti
| Componente | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNA polimerasi V2 (senza glicerolo) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| 10 buffer HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Applicazioni
1.Amplificazione isotermica LAMP
2.Reazione di spostamento a singolo filamento di DNA
3.Sequenziamento del gene ad alto GC
4.Sequenziamento del DNA a livello di nanogrammi.
Condizioni di conservazione
Trasporto a temperatura inferiore a 0°C e conservazione a -25°C~-15°C.
Definizione di unità
Una unità è definita come la quantità di enzima che incorpora 25 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 65°C.
Reazione LAMPADA
| Componenti | 25 μLSistema |
| 10 buffer HC Bst V2 | 2,5 µl |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 µl |
| dNTP (10 mM ciascuno) | 3,5 µl |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 microlitri |
| Miscela di primerb | 6 µl |
| Bst DNA Polimerasi V2 (senza glicerolo) (32 U/uL) | 0,25 µl |
| Modello | ×μL |
| ddH₂O | Fino a 25 µl |
Appunti:
1) un.SYTOTM 16 Verde (25×): secondo le esigenze sperimentali, altri coloranti possono essere utilizzati come sostituti;
2) b.Miscela di primer: ottenuta miscelando 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB e altri volumi.
Reazione e condizione
1 × HC Bst V2 Buffer, la temperatura di incubazione è compresa tra 60°C e 65°C.
Inattivazione del calore
80°C, 20 min.
