RT-LAMP Master Mix colorimetrico HCB5204A
Questo prodotto contiene tampone di reazione, miscela di enzimi RT (Bst DNA polimerasi e trascrittasi inversa resistente al calore), protettivi liofilizzati e componenti coloranti cromogenici.Per utilizzarlo è sufficiente utilizzare Buffer, l'enzima di reazione e il primer vengono miscelati e aggiunti al modello;l'aggiunta del protettore liofilizzato può essere semplice.È stato collegato a un liofilizzatore e liofilizzato e, quando utilizzato, sono stati aggiunti solo i primer e i modelli.Questo kit fornisce un rilevamento visivo rapido e chiaro dell'amplificazione, la cui reazione negativa è indicata in rosso mentre la reazione positiva è indicata dal viraggio al giallo.
Componente
| Componente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (con colorante) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60ml×10 |
| Miscela di enzimi RT | 270 µl | 2,70 ml | 2,70ml×10 |
| Protettivo liofilizzato | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60ml×20 |
Applicazioni
Per l'amplificazione isotermica del DNA o dell'RNA.
Condizioni di archiviazione
Trasportato con ghiaccio secco, conservato a -25~ -15℃.Evitare frequenti geli-disgeli, il prodotto ha validità 12 mesi.
Protocollo
1.Scongelare il tampone di reazione da utilizzare a temperatura ambiente.Vortexare brevemente o capovolgere le provette più volte per miscelare accuratamente, quindi centrifugare per raccogliere il liquido sul fondo della provetta.
2.Preparazione del sistema di reazione.Questo reagente può essere preparato in due sistemi di reazione, miscela di reazione liquida e miscela di sistema liofilizzata.
1) Preparare la miscela di reazione liquida
| Componente | Volume |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (con colorante) | 10 µl |
| Miscela di enzimi RT | 2,8 microlitri |
| 10 miscele di primera | 5 µl |
| Modelli DNA/RNA b | ×μL |
| Acqua priva di nucleasi | Fino a 50 µl |
2) Miscela del sistema di liofilizzazione
① Preparare la miscela liofilizzata
| Componente | Volume |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (con colorante) | 10 µl |
| Protettivo liofilizzato | 20 µl |
| Miscela di enzimi RT | 2,8 microlitri |
| Acqua priva di nucleasi | Fino a 50 µl |
② Liofilizzazione: la miscela preparata è stata liofilizzata in un sistema da 50μL
③ Preparare la miscela di reazione
| Componente | Volume |
| Miscela liofilizzata | 1 pezzo |
| 10 miscele di primera | 5 µl |
| Modelli DNA/RNA b | ×μL |
| Acqua priva di nucleasi | Fino a 50 µl |
Appunti:
1) un.Miscela 10×primer: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (solubile in acqua) è consigliato per il templ dell'acido nucleico.
1.Incubare a 65°C per 30-45 minuti, che possono essere opportunamente prolungati in base al cambiamento di colore. Tempo di reazione.
2.Ad occhio nudo, il giallo era positivo e il rosso era negativo.
Appunti
1.Potrebbe apparire del sale sul fondo della provetta del tampone, agitare brevemente le provette o capovolgerle più volte per miscelarle accuratamente a temperatura ambiente.
2.La temperatura di reazione può essere ottimizzata tra 62 ℃ e 68 ℃ a seconda delle condizioni dei primer.
3.I reagenti confezionati non devono essere esposti all'aria per lungo tempo.
4.La reazione di scolorimento rosso e giallo dipende dal cambiamento di pH del sistema di reazione, si prega di non utilizzare la soluzione di conservazione dell'acido nucleico Tris contenente, si consiglia di utilizzare ddH2O acido nucleico immagazzinato;
5.L'esperimento dovrebbe essere standardizzato, compresa la preparazione del sistema di reazione, la liofilizzazione, il trattamento del campione e il processo di aggiunta del campione;
6.Per evitare la contaminazione, si consiglia di preparare il sistema di reazione in un banco ultra pulito, in altri Aggiungere modelli alla cappa chimica della stanza per evitare interferenze false positive.
